Också kallad RFLP-analys, utnyttjar tekniken polymorfierna i enskilda människors genetiska koder. Även om alla medlemmar av en art har i huvudsak samma genetiska smink, svarar dessa små skillnader för variationer i fenotyp, såsom utseende eller metabolism, mellan individer.
RFLP: Analysteknik och applikationer
RFLP-analysteknik innefattar att skära en specifik region av DNA med känd variabilitet, med restriktionsenzymer, sedan separera DNA-fragmenten med agarosgelelektrofores och bestämma antalet fragment och relativa storlekar.
Ett restriktionsenzym är ett enzym, en proteinmolekyl som skär DNA vid restriktionsställen. I huvudsak bryts DNA-provet upp och digereras av restriktionsenzymerna. De resulterande fragmenten separeras i enlighet med deras längder och mönstret av fragmentstorlekar kommer att skilja sig från varje testad individ.
Den fullständiga RFLP-processen kräver sond-märkning, DNA-fragmentering, elektrofores, blottning, hybridisering, tvättning och autoradiografi. Den detekterade RFLP visualiseras med hjälp av röntgenfilm i en autoradiografi, där DNA-fragment kan ses och analyseras när de är separerade från varandra genom elektrofores.
Några av ansökningarna för RFLP-analys inkluderar:
- DNA fingeravtryck . Rättsmedicinska forskare kan använda RFLP-analys för att identifiera misstänkta på grundval av bevisprover som samlats in på brottsscener.
- Faderskap. RFLP används också vid bestämning av faderskap eller för att spåra anor.
- Genetisk mångfald. Tekniken kan användas för att studera evolution och migrering av vilda djur, studera avelsmönster i djurpopulationer och upptäcka och diagnostisera vissa sjukdomar.
Tekniken att använda RFLP-detektering av variation i genom är ett viktigt verktyg i genomkartläggning och genetisk sjukdomsanalys. Om platsen för en viss sjukdomsgen söks i en viss kromosom, skulle forskare analysera DNA hos medlemmar i en familj med sjukdomen och leta efter liknande arvsmönster i RFLP-alleler.
När en sjukdomsgen är lokaliserad kan ledning av RFLP-analys på andra familjemedlemmar avslöja en bärare av mutantgenerna eller signalen övergripande sjukdomsrisk. Det är viktigt att notera att RFLP-tekniken inte används allmänt nu när nyare, mer robusta tekniker används för DNA-analys i rättsmedicin och flera andra områden.
Negativt aspekt av analysen
Tyvärr är RFLP-analystekniken långsam och långsam. Bortsett från att man kräver en stor mängd prov-DNA, skulle provet vanligtvis behöva vara ungefär en kvarts storlek, vilket är relativt stort för DNA-prover. Processen, från sondmärkning till tvättning och autoradiografi, kan ta upp till en hela månaden för att slutföra.
Resultat från Human Genome Project har ganska mycket ersatt behovet av RFLP. Projektet tillåtes för att bestämma hela sekvensen av DNA som finns i humana celler, det humana genomet och för att identifiera alla generna i det humana genomet.