Dessa buffertar kan användas för biologiska tillämpningar vid nära neutralt pH
De tre pKa-värdena för fosforsyra (från CRC Handbook of Chemistry and Physics) är 2,16, 7,21 och 12,32. Mononatriumfosfat och dess konjugatbas, dinatriumfosfat används vanligtvis för att generera buffertar med pH-värden runt 7, för biologiska tillämpningar, såsom visas här.
Att göra denna buffert är lite svårare än att göra TAE och TBE buffertar. Det är dock inte extremt svårt. Bara genomsnittet. Det bör ta ca 10 minuter att piska upp denna buffert. Här är hur.
1. Beslut om buffertegenskaperna
Innan du gör en buffert bör du först veta vilken molaritet du vill att den ska vara, vilken volym du ska göra och vad önskat pH är. De flesta buffertar fungerar bäst vid koncentrationer mellan 0,1 M och 10 M. pH bör ligga inom 1 pH-enhet i syra / konjugatbasen pKa. För enkelhet kommer denna provberäkning att vara för 1 liter buffert.
2. Bestäm förhållandet mellan syra och bas
Använd Henderson-Hasselbalch ekvationen (nedan) för att bestämma vilket förhållande syra till bas som krävs för att göra en buffert med önskat pH. Använd pKa-värdet närmast ditt önskade pH och förhållandet kommer att referera till syra-bas-konjugatparet som motsvarar den pKa.
HH ekvation: pH = pKa + logg ([Base] / [Acid])
För en buffert med pH 6,9, [bas] / [syra] = 0,4889
Ersättare för [Acid] och Solve for [Base]
Den önskade molariteten hos bufferten är summan av [Acid] + [Base].
För en 1 M buffert, [Base] + [Acid] = 1 och [Base] = 1 - [Acid]
Genom att ersätta detta i förhållande ekvationen, från steg 2 får du:
[Syra] = 0,6712 mol / L
Lös för [Syra]
Med hjälp av ekvationen: [Base] = 1 - [Acid] kan du beräkna det:
[Base] = 0.3288 mol / L
3. Blanda syra- och konjugatbasen
När du har använt Henderson-Hasselbalch-ekvationen för att beräkna vilket förhållande syra till bas som krävs för din buffert, förbered dig strax under 1 liter lösning med rätt mängd mononatriumfosfat och dinatriumfosfat.
4. Kontrollera pH
Använd en pH-sond för att bekräfta att det korrekta pH-värdet för bufferten uppnås. Justera lite efter behov med fosforsyra eller natriumhydroxid (NaOH).
5. Korrigera volymen
När det önskade pH-värdet har uppnåtts, bringa buffertvolymen till 1 liter. Späd sedan bufferten efter önskemål. Samma buffert kan spädas för att skapa buffertar på 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M eller något däremellan.
6. Tips för bufferten
Kom ihåg att pKa inte enkelt mäts till ett exakt värde. Något olika värden kan vara tillgängliga i litteraturen från olika källor.
7. Vad du behöver
För att göra bufferten behöver du tre ämnen, medan resterande material är utrustning. Ämnena är mononatriumfosfat, dinatriumfosfat och fosforsyra eller natriumhydroxid för att justera pH.
Du behöver också en pH-mätare och sond och lämplig labware. Detta inkluderar en volymkolv, graderade cylindrar, bägare och rörstänger.
Slutligen behöver du en rörlig kokplatta.