Hur man gör denna immunhistokemiska färgningsbuffert
Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) är en buffertlösning som vanligtvis används för immunohistokemisk (IHC) färgning och används ofta i biologisk forskning. PBS är en vattenbaserad saltlösning innehållande natriumvätefosfat, natriumklorid och i vissa fall kaliumklorid och kaliumdihydrogenfosfat.
Immunohistokemisk färgning
Immunohistokemi hänför sig till processen att detektera antigener såsom proteiner i cellerna i en vävnadssektion genom att använda antikroppsprincipen som specifikt bindar antigen till biologiska vävnader.
Immunfluorescerande färgning var den första immunohistokemiska färgningsmetoden.
Antigener blir synliga när de är konjugerade med antikroppar med hjälp av fluorescensfärger på grund av en antigen-antikroppsbindningsreaktion. Denna process uppträder när den aktiveras av spännande ljus av en specifik våglängd under ett fluorescerande mikroskop.
Osmolaritet och jonkoncentrationer av lösningarna matchar människokroppen - de är isotoniska.
Ett recept på PBS
Du kan förbereda PBS på flera sätt. Det finns flera formler. Vissa av dem innehåller inte kalium, medan andra innehåller kalcium eller magnesium .
Detta recept är relativt enkelt. Det är för 10X PBS stamlösning (0.1M). Du kan dock också göra en 1X stamlösning, eller börja med detta 10X recept och späd det till 1X.
Hela processen tar cirka 10 minuter.
Ett alternativ att lägga till Tween finns också.
Vad du behöver göra för PBS-buffert
- Natriumfosfat monobasisk (vattenfri)
- Natriumfosfatdibasisk (vattenfri)
- Natriumklorid
- Skala och väga båtar
- Magnetisk omrörare och omröringsstång
- En pH-sond som är kalibrerad och lämpliga lösningar för justering av pH
- 1 liter volymkolv
- Tween 20 (valfritt)
Hur man gör fosfatbuffrad saltlösning (PBS)
Väg 10,9 g vattenfri natriumfosfatdibasisk (Na2HPO4), 3,2 g vattenfri natriumfosfat monobasisk (NaH2PO4) och 90 g natriumklorid (NaCl).
Lös upp i drygt 1 liter destillerat vatten.
Justera pH till 7,4 och gör lösningen upp till en slutlig volym på 1 liter.
Späd 10X före användning och sätt om pH-värdet om nödvändigt.
Du kan göra en PBS-lösning innehållande 0,5 procent Tween 20 genom att tillsätta 5 ml Tween 20 till 1L-lösningen.
Tips för att göra PBS-buffert
Förvara bufferten vid rumstemperatur när du har gjort PBS-lösningen.
Icke-vattenfria reagenser kan ersättas men du måste räkna om lämplig massa av var och en för att rymma de tillsatta vattenmolekylerna.
Användningar av fosfatbuffrad saltlösning (PBS)
Fosfatbuffrad saltlösning har många användningsområden eftersom den är isotonisk och giftfri för de flesta celler. Det kan användas för att späda ämnen och det används ofta för att skölja behållare av celler. PBS kan användas som ett utspädningsmedel i olika metoder för att torka biomolekylerna, eftersom vattenmolekylerna inom den kommer att struktureras kring substansproteinet, till exempel. Det kommer att "torkas" och immobiliseras till en fast yta.
PH-värdet förblir stabilt och konsekvent för att förhindra förstöring av celler.
Den tunna filmen av vatten som binder till ämnet förhindrar denaturering eller andra konformationsförändringar. Karbonatbuffertar kan användas för samma ändamål men med mindre effektivitet.
PBS kan också användas för att ta ett referensspektrum vid mätning av proteinadsorptionen i ellipsometri.