Denna buffert används för elektroforeseparation av DNA
TBE-bufferten är speciellt användbar för separation av mindre DNA-fragment (MW <1000), såsom små produkter med restriktionsenzym digereringar.
TBE har en större bufferkapacitet och ger skarpare upplösning än TAE-buffert . TAE-buffert är en lösning som består av Tris-bas, ättiksyra och EDTA (Tris-acetat-EDTA).
TBE är i allmänhet dyrare än TAE och hämmar DNA-ligas, vilket kan orsaka problem om efterföljande DNA-rening och ligeringsträkter är avsedda. Med de tre enkla stegen som följer kan du lära dig hur du gör TBE-buffert. Det ska ta mer än 30 minuter att skapa den här bufferten. Här är hur:
Förbered en lagerlösning av EDTA
En lösning av EDTA (etylendiamintetraättiksyra) bör framställas före tidpunkten. EDTA kommer inte att gå helt i lösning tills pH-värdet är inställt på ca 8,0. För en 500 milliliter stamlösning av 0,5 M EDTA väger 93,05 gram EDTA dinatriumsalt (FW = 372,2). Lös det sedan i 400 ml avjoniserat vatten och justera pH med NaOH. Därefter fyller lösningen upp till en slutlig volym på 500 ml.
Förbered en lagerlösning av TBE
Gör en koncentrerad (5x) stamlösning av TBE genom att väga 54 g Tris-bas (FW = 121,14) och 27,5 g borsyra (FW = 61,83) och upplösa båda i ca 900 ml avjoniserat vatten. Tillsätt sedan 20 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0) och justera lösningen till en slutlig volym på 1 liter.
Denna lösning kan lagras vid rumstemperatur men en fällning kommer att bildas i äldre lösningar. Förvara bufferten i glasflaskor och kassera om en fällning har bildats.
Förbered en arbetslösning av TBE
För agarosgelelektrofores kan en TBE-buffert användas vid en koncentration av 0,5x (1:10 utspädning av det koncentrerade materialet). Tillsätt stamlösningen med 10x i avjoniserat vatten. Slutliga lösliga koncentrationer är 45 mM Tris-borat och 1 mM EDTA. Bufferten är nu klar för användning vid körning av en agarosgel .
Vad du behöver
För att göra TBE-buffert behöver du bara fyra ämnen. De återstående föremålen i denna lista är utrustning. De fyra ämnen som krävs är EDTA-dinatriumsalt, Tris-bas, borsyra och avjoniserat vatten.
När det gäller utrustning behöver du en pH-mätare och kalibreringsstandard, i förekommande fall. Förutom det behöver du 600 milliliter och 1500 milliliter bägare eller kolvar. Att avrunda dina utrustningsbehov är graduerade cylindrar och rörstänger och rörplattor.
Kolla in inventeringen på labbet som du ska använda för att se till att du har allt du behöver innan du börjar. Ingenting är sämre än att behöva stanna i mitten av att förbereda en lösning för att du har slutfört rätt material.
Om ditt laboratorium är i skolan eller på din arbetsplats, kolla med rätt personal för att se att de har alla föremål på lageret. Om du gör det kan du spara tid och energi i slutet.