Hur man fryser-torkar en bakteriekultur (lyofilisering)

Lyofilisering, eller frystorkning, är ett kort laboratorieförfarande

Frystorkning, även kallad lyofilisering eller kryosiccation, är processen att avlägsna vatten från en produkt efter det att den är fryst (och sedan placerad under vakuum) vilket gör att is kan byta från en fast till en ånga utan att gå igenom en vätskefas. Is (eller andra frusna lösningsmedel) avlägsnas från en produkt genom sublimeringsprocessen och bundna vattenmolekyler avlägsnas genom desorptionsprocessen.

Grunderna för lyofilisering

Ett av de bästa sätten att lagra bakterier, svamp, jäst eller annan mikroorganismerkultur under långa perioder är att använda frystorkningsprocessen. Detta korta laboratorieförfarande kan utföras med någon kommersiellt tillgänglig frystorkare som bevarar din kultursamling. Eftersom lyofilisering är den mest komplexa och dyra typen av torkning, är processen vanligtvis begränsad till känsliga värmekänsliga material av högt värde. Ämnen som inte är skadade genom frysning kan vanligtvis lyofiliseras så att kylförvaring är onödig.

Denna process kan ta så lite som tre timmar, och så länge som 24 timmar, inte inklusive odlingstillväxt.

Steg-för-steg-processen för lyofilisering

1. Först växer en nattkultur eller gräsmatta av mikroorganismen på LB eller annan lämplig näringsagaragarplatta.

2. Därefter förbereda sterila crimp-cap-ampuller genom autoklavering i förväg, med kåporna (gummipropparna) placerade löst ovanpå. Placera pappersetiketter skrivna med kulturens identifiering inuti rören före autoklavering. Alternativt använd rör med kepsar avsedda för sterilitet .

1. Tillsätt 4 ml lyofiliseringsbuffert till plattan. Om så är nödvändigt kan cellerna suspenderas med en steril glasstång.

2. Överför snabbt kultursuspensionen till de steriliserade ampullerna. Tillsätt ca 1,5 ml per injektionsflaska. Tätning med gummikåpan.

3. Frys kultursuspensionen inuti flaskorna genom att placera flaskorna i en -20 grader Celcius-frys.

1. När kulturerna är frusna, förbered frystorken genom att slå på den och tillåta tid för lämpliga temperatur- och vakuumförhållanden att stabilisera. Gör det enligt tillverkarens instruktioner för det specifika märket med frystorkare som du använder.

2. Lägg försiktigt och aseptiskt hylsorna på lådorna löst ovanpå flaskorna, så att fukt kan komma undan under frystorkningsprocessen och placera injektionsflaskorna i en frystorkar. Applicera vakuumet i kammaren enligt tillverkarens instruktioner.

3. Låt odlingstiden fullständigt lyofilisera (torka ut). Det kan ta från några timmar till över natten beroende på volymen på varje prov och hur många prov du har.

4. Ta bort provet från frystorkarens kammare enligt tillverkarens anvisningar och försegla försiktigt injektionsflaskorna med gummikåporna, därefter korkstopparna.

5. Förvara den lyofiliserade odlingssamlingen vid rumstemperatur.

Produkter du behöver

• Frystork
• Näringsämne eller andra lämpliga agarplattor (och inkubator för odling av odling)
• Glasstav
• Lyofiliseringsbuffert
• Crimp-top-flaskor med gummiproppar (och en crimper för att applicera locken)
• Frys

<sub>Referens:

SP Scientific. Grundläggande principer för frystorkning. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>